Stempeltechnik Biologie?
Hallo:) Wir haben vor kurzem die Stempeltechnik behandelt. In der Aufgabe wurde in ein Plasmid, das Resistenzgene für Ampicillin und Tetracylin hat, mittels einem Restriktionsenzym in das Resistenzgen für Ampicillin eine Fremd DNA (Insulingen) eingebaut. Ich habe verstanden dass die Bakterien, die dieses Plasmid aufgenommen haben, nur resistent gegen Tetracylin sind weil durch den Einbau der Fremdgene die Resistenzgene des Ampicillin kaputt ging. Aber dann gibt es auch noch Bakterien, die gegen beides resistent sind d.h diese haben das Plasmin bzw. die Fremd-DNA nicht aufgenommen und das ist auch schon der Punkt den ich nicht verstehe.
Eine Bakterie bekommt ein Plasmid eingebaut, das nur resistent gegen Tetracylin ist, da die Resistenzgene für Ampicillin durch den Einbau der Fremd-DNA nicht mehr funktioniert. Wie kann es dann Bakterien geben, die gegen beides resistent sind, wenn doch alle das gleiche Plasmid besitzen? Ich kann das einfach nicht nachvollziehen und bitte um eure Hilfe! Danke!
1 Antwort
Das ganze ist recht einfach:
Das leere Palasmid enthält Resistenzen gegen Amp und Tet. Im Amp Gen wird das Plasmid geschnitten. Das geschnittene Plasmid wird zusammen mit dem Insulingen wieder zusammengesetzt. Bei dem Prozess ist es zufällig ob das Plasmid in der ursprünglichen Form, oder zusammen mit dem Insulingen zusammengesetzt wird. Bei diesem, Ligation genannten, Prozess entsteht ein Gemisch aus Plamiden ohne Insulingen und Plasmiden mit einem oder (sehr selten) zwei Insulingenen. Dieses Gemisch gibt man zu eine Bakterienkultur, die vorbehandelt wurde um Plasmide aufnehmen zu können. Dabei nimmt eine Zelle maximal ein Plasmid auf. Die meisten Bakterien nehmen aber kein Plasmid auf. Das Bakteriengemisch bringt man nun auf Platten mit Tetracyclin. Es werden nur Bakterien wachsen, die ein Plasmid haben. Nachdem Kolonien gewachsen sind stempelt man die Kolonien auf Platten mit Amp. Kolonien, die auf der Tet Platte, nicht aber auf der Amp Platte wachsen haben das Insulingen aufgenommen.
Inzwischen arbeitet aber fast niemand mehr mit Doppelresistenzen. Viel viel verbreiteter sind Plasmide bei denen, wenn keine DNA aufgenommen wurde, die Bakterienkolonie blau wird, oder die Kolonie garnicht wächst.