Blau Weiß Selektion?
Hallo,
ich habe folgende Aufgabe:
Sie möchten ein kurzes DNA-Stück von 20-30 bp Länge in ein Plasmid für Blau-Weiß-Selektion klonieren. Können Sie sich ein Szenario vorstellen, in dem eine Blau-Weiß-Selektion nicht funktionieren würde?
Kann mir das jemand erklären. Habe leider gar keine Ahnung, was ich da schreiben sollte.
Danke im Voraus;)
1 Antwort
Naja, ich denke diese Aufgabe spielt darauf an, was man falsch machen kann, sodass es auf der Bakterienplatte weiß bleibt, aber sich dort dennoch Bakterien OHNE das gewünschte kurze DNA-Stück befinden, also die falschen selektiert werden.
Für die Blau-Weiß-Selektion ist es essentiell, dass die DNA dort eingesetzt wird, wo sich das Beta-Galactosidase-Gen befindet. Denn dadurch wird dieses Gen nicht mehr so abgelesen, dass Beta-Galactosidase entsteht. Ohne Beta-Galactosidase findet kein Zuckerumsatz, also auch kein Farbumsatz von weiß zu blau statt.
Anhand der Farbe lässt sich also erkennen, ob die DNA richtig eingesetzt wurde, also im Beta-Galactosidasegen. Dies ist der Fall, wenn die Platte weiß bleibt.
Eine Blau-Weiß-Selektion funktioniert also dann nicht, wenn das Plasmid falsch aufgebaut ist. Enthält das Plasmid bereits von Anfang an kein Beta-Galactosidasegen, so bleibt die Platte unter allen Umständen weiß (und auch falsche Bakterien werden selektiert).
Das Verfahren funktioniert auch dann nicht, wenn vergessen wird, das passende Antibiotikum aufzutragen. Denn dann werden auch die Bakterien selektiert, die das Plasmid nicht mal erhalten haben, also die, die das kurze DNA-Stück gar nicht enthalten, denn dann ist zum Überleben nicht das Antibiotikaresistenz-Gen nötig, welches sich auf dem Plasmid befindet.
Hast du es verstanden?
LG Katharina Hohenfels