Bleibt der Primer an der DNA hängen?
Angenommen, man führt beispielsweise eine PCR durch, dann benötigt man natürlich Primer. Diese lagern sich bekanntlich am 3'-Ende der DNA an. Anschließend kann die Polymerase daran den neu entstehenden komplementären DNA-Strang anbauen. Meine Frage wäre nun, was mit dem Primer geschieht. Bleibt der hängen und wird er beim nächsten Amplifikationszyklus wieder kopiert, sodass ein komplementärer Primer entstünde, oder fällt er ab und kann wieder verwendet werden?
1 Antwort
Der Primer wird so designed, dass er sich bei ~60-70 *C an den DNA Strang anlagert.
Bei jedem nächsten Zyklus wird die Reaktion auf 95 *C erhitzt - dadurch denaturiert alles wieder zu Einzelsträngen, wobei die Primer nicht verschont bleiben. Bei der nächsten Runde lagern sich dann neue Primer an, die "alten" sind Teil des PCR Produkts - deswegen werden Primer im Überschuss eingesetzt.
LG
Ich hoffe, wir sind uns einige, dass bei einer PCR immer zwei Primer eingesetzt werden (sense, antisense)?!