Guten Tag
Bei der Sanger-Sequenzierung werden in die PCR-tubes Di-Desoxy-Nucleotide eingefügt, die, wenn sie eingebaut werden, zum Kettenabbruch führen. So entstehen unterschiedlich grosse DNA-Fragmente, die mithilfe von Gelelektrophorese der grösse nach geordnet werden. So weit, so gut. Was ich aber nicht verstehe, ist der Schritt, mit dem man zur eigentlichen Sequenz kommt.
Bei diesem Video verstehe ich alles bis Minute 04:00. Danach nicht mehr, denn aus einem Grund, den ich nicht verstehe, ist die DNA-Sequenz die Abfolge der Stopp-Nucleotide. Warum ergibt das Sinn? Wir wissen doch noch immer nichts über die Sequenz der ursprünglichen DNA-Fragments, das wir mit PCR amplifiziert haben.
Sanger Sequenzierung • Prinzip und Ablauf · [mit Video] (studyflix.de)