PCR DNA-Sequenz?

Warum muss die vervielfältigte DNA-Sequenz bei der PCR zumindest teilweise bekannt sein? und Warum ist es nicht mittels PCR möglich ein komplettes Genom zu vervielfältigen?

Answer 1

[Darwinist]

Du brauchst für die DNA-Polymerase einen Punkt, der ihr als Start dient. Das geschieht durch den sog. Primer. Da du ja beide Einzelstränge vervielfältigen willst, benötigst du für jeden Strang einen Primer. Die Primer sind kurze einzelsträngige DNA-Fragmente, die spezifisch am Strang binden und daher den exakten Startpunkt vorgeben. Die Sequenzen, an die die Primer binden, müssen dafür bekannt sein.

Du hast z. B. folgende Sequenz:

5'-AAGT|CTTGACAGTTTAT|GCGT-3'

3'_TTCA|GAACTGTCAAATA|CGCA-5'

Die Polymerase kann nur in 5'-3'-Richtung arbeiten. Daher muss ein Primer immer in 5'-3'-Richtung gehen. Der obere Strang (forward strand) könnte z. B. mit dem Primer 5'-ACGC-3' amplifiziert werden. Der untere Strang (reverse strand) mit dem Primer 5'-AAGT-3'.

Man kann mit der PCR keine ganzen Genome vervielfältigen, weil die Polymerase mit der Zeit "müde" wird. Je länger der Strang, umso mehr Fehler unterlaufen ihr. Außerdem ist es ja meist überhaupt nicht notwendig, das ganze Genom zu sequenzieren, weil schon einige wenige Gene oder andere Loci reichen.

Woher ich das weiß: Studium / Ausbildung – Biologiestudium, Universität Leipzig