Proteingehalt in Homogenat berechnen?
Guten Abend (eher gute Nacht),
es ist schon spät, aber ich wollte die Frage schon einmal veröffentlichen in der Hoffnung, dass irgendwann im Laufe des Tages evtl. darauf antworten und mir helfen kann.
Es geht um eine Biochemie-Aufgabe, bei der ich einfach auf keinen Lösungsweg komme. Daher wollte ich hier fragen, ob mir jemand erklären könnte, wie man sich die (bekannte) Lösung herleitet?
Es ist auch keine Hausaufgabe oder dergleichen; die Aufgabe entstammt einer Altfragensammlung und ich muss demnächst eine Klausur u. a. zu dem Thema schreiben.
ul soll "Mikroliter" heißen.
Aufgabenstellung:
Sie bestimmen die Proteinkonzentration im Schweinehirn mittels der Biuret-Methode. Dazu homogenisieren sie 1g (Dichte 1g/ml) Schweinehirn zusammen mit 3 ml SDS-haltigem Puffer. Je 50 ul dieses Homogenats pipettieren sie in drei Vertiefungen (“Wells”) einer Mikrotiterplatte, die bereits je 50 ul Wasser enthalten.
15 min nach Zugabe von 200 ul Biuret-Reagenz vermessen ist die Extinktion bei 546 nm und Sie erhalten im Mittel eine Extinktion von 0,53. Gleichbehandelte Wells der Mikrotiterplatte mit bekannten Mengen an Rinderserum-Albumin (BSA) ergeben die folgende Eichgerade:
Wie hoch ist der Proteinanteil im Schweinehirn nach dieser Messung am ehesten?
(Bild wurde sehr schnell abgezeichnet, daher ist das Diagramm nicht so ästhetisch ansprechend ;)
Lösung: 80 mg/g
Wie kommt man darauf?
Ich weiß, dass ich auf der Gerade erstmal den Schnittpunkt der gegebenen Extinktion (0,53) suchen muss; der liegt wohl bei 1 mg (vielleicht soll es auch eigentlich 0,8 mg sein? Kann ich ob der Ungenauigkeit des Graphen nicht ganz sagen). Und dann muss man vermutlich die vorherigen Verdünnungen irgendwie rausrechnen, aber wie? Ich komme da auf eine 1:4- und eine 1:6-Verdünnung, aber (allein) multipliziert mit den Verdünnungsfaktoren komme ich nicht auf das gesuchte Ergebnis :/
Vielen lieben Dank schonmal für jede Hilfe!
1 Antwort
Die Messung von 50 μl des Homogenats zeigt gemäß Eichkurve dieselbe Extinktion wie 1 mg BSA. Das heißt doch, dass in den 50 μl des Homogenats 1 mg Protein stecken. Das Gesamtvolumen des Homogenat beträgt 4 mL. Davon sind die gemessenen 50 μl ein aliquoter Teil von 1/80. Mit anderen Worten, in der Stammlösung steckt 80 mal mehr Protein als in dem Well, in dem gemessen wurde, also 80 mg, falls bei E = 0,53 1 mg BSA (Protein) kalibriert wurde. Die Proteinkonzentration im Schweinehirn ist somit 80 mg/g. Das ist ein durchaus realistischer Wert.
Ah vielen Dank, das ergibt Sinn :o
Eigentlich bin ich nur nochmal hergekommen, um zu sagen, dass ichs vermutlich gelöst habe, aber wahrscheinlich ist mein Lösungsweg dann nur zufällig richtig 😅
Ich wäre jetzt so darauf gekommen, dass in jedem Well ja laut Diagramm 1 mg Protein enthalten sind. Dieses 1 mg befindet sich in einem Well mit insgesamt 300 ul Inhalt (50 Homogenat, 50 Wasser, 200 Biuret), sprich 1 mg/300 ul bzw. 0,3 ml, was man in etwa mit 0,3 g gleichsetzen kann
Also 1 mg/0,3 g ≈ 3,3 mg/g, multipliziert mit den Verdünnungsfaktoren 4 und 6 käme man dann auf ca. 79,2 mg/g, was rund ja bei 80 mg/g liegen würde 😅